液氮保藏法，亦稱超低溫保藏法。主要利用微生物在低于-130°C的低溫下新陳代謝趨于停止的原理，在液氮中(-196°C的超低溫下)有效地進(jìn)行菌種保藏的方法。此法操作簡便、高效，保藏期一般可達(dá)到15年以上，是目前公認(rèn)的菌種長期保藏技術(shù)之一，并且適用于各類微生物菌種的保藏。但是，采用液氮保藏，需購置超低溫液氮設(shè)備，且液氮消耗量大，費(fèi)用高。液氮低溫保藏的保護(hù)劑，一般選擇甘油、二甲基亞砜、糊精、血清蛋白、聚乙烯氮戊環(huán)、吐溫80等，最常用的是甘油(10%?20%)，不同微生物應(yīng)選擇不同的保護(hù)劑，保護(hù)劑的濃度應(yīng)控制在不造成微生物死亡為宜。

操作方法

把微生物細(xì)胞混懸于含保護(hù)劑(20%甘油，10%DMSO等)的液體培養(yǎng)基中(也可把含菌瓊脂塊直接浸入含保護(hù)劑的培養(yǎng)液中)，分裝入耐低溫的安瓿瓶中后，作緩慢預(yù)冷，然后移至液氮罐中的液相(-196℃)或氣相(-156℃)作長期超低溫保藏。

操作原則

"慢凍快溶"。

原理

利用微生物在-130℃以下新陳代謝趨于停止而有效地保藏微生物。

0.5mol/L左右的甘油或二甲亞砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)可透入細(xì)胞，并通過降低強(qiáng)烈的脫水作用而保護(hù)細(xì)胞。

優(yōu)點(diǎn)

保藏期長(15年以上)，且適合保藏各類微生物，尤其適宜于保存難以用冷凍干燥保藏法保藏的微生物，如支原體、衣原體、不產(chǎn)孢子的真菌、微藻和原生動(dòng)物等。

缺點(diǎn)

需要液氮罐等特殊設(shè)備，且管理費(fèi)用高、操作較復(fù)雜、發(fā)放不便等。

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